Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций. Частная микробиология

Microbiology of Staphylococcus:-

Coagulase reaction

Proteins and virulence

Taxonomy and naming conventions

Identifications under the microscope

Catalase test

Identification of S.aureus

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Подобные документы

Главная » ТЕЛЕ2 » Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций. Частная микробиология

Staphylococcus aureus bacteria are pathogens to both man and other mammals. They are gram positive bacteria that are small round in shape (cocci) and occur as clusters appearing like a bunch of grapes on electron microscopy.

Staphylococcus were earlier divided into two groups on the basis of their ability to clot blood plasma. The coagulase-positive staphylococci constitute the most pathogenic species S aureus . The coagulase-negative staphylococci (CNS) are now known to comprise over 30 other species. It is the CNS that is present as harmless bacteria on skin but some of these may cause infections as well.

These days coagulase reaction is no longer used to classify S.aureus. This is because coagulase is a marker for S aureus but there is no direct evidence that it is a virulence factor. Nevertheless, the term is still in widespread use among clinical microbiologists.

S. aureus expresses certain proteins and polysaccharides on its surface. This is correlated with virulence. Virulence is the effect of many factors expressed during infection. The bacteria also produce certain toxins. In the body antibodies neutralize staphylococcal toxins and enzymes.

At least 30 species of staphylococci have been recognized by biochemical analysis. This is especially so with DNA-DNA hybridization. Of these, 11 are found in humans as harmless bacteria on skin, in the nose and throat. These can cause disease and infections in certain situations.

These bacteria are Gram-positive cocci about 0.5 - 1.0 μm in diameter. They are present as grape like clusters. They may also occur in pairs and occasionally in short chains. The clusters arise because staphylococci divide in two planes. This clustering helps to distinguish staphylococci from streptococci, which usually grow in chains.

Growing on solid medium colonies of S. aureus these appear as golden clumps.

This test helps to distinguish between streptococci (that is catalase-negative) and staphylococci (which are catalase positive). On an agar slant or broth culture of the bacteria several drops of 3% hydrogen peroxide are applied. Catalase-positive cultures bubble at once. This cannot be done on blood agar since blood itself will produce bubbles.

After sample from the lesions are taken, they can be stained with Gram stain. S. Aureus is Gram positive. The organism from the clinical specimen from blood culture or pus is then streaked over solid media such as blood agar, tryptic soy agar or heart infusion agar. If the specimen is suspected to be contaminated it is plated on mannitol salt agar containing 7.5% sodium chloride.

Another test is production of thermostable deoxyribonuclease. S aureus can be confirmed by testing colonies for agglutination with latex particles coated with immunoglobulin G and fibrinogen which bind protein A and the clumping factor, respectively.

Microscopically cells occur singly and in pairs, short chains, and grape-like clusters. The cell wall of the bacteria contains teichoic acid. Ribitol teichoic acid (Polysaccharide A) is present in Staphylococcus aureus . Protein A uniformly coats surface of S. aureus and is usually oxidase negative.

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru

Введение

Во второй половине XX века патогенные стафилококки, вытеснив многие микроорганизмы, стали ведущими возбудителями разнообразных, тяжело протекающих заболеваний.

К ним относятся пневмонии, абсцессы легких, менингиты, перитониты, сепсис, эндокардиты, токсические энтериты, воспаление мочевого тракта, гинекологические заболевания, гнойные осложнения после ранений и операций, отиты, послеродовые маститы и другие. Патогенный стафилококк может вызывать и пищевые отравления, проявляющиеся в виде эпидемических вспышек.

Актуальность изучения стафилококковых инфекций трудно переоценить. В связи с повсеместным ростом стафилококковых инфекций исследования лабораторной диагностики и профилактики стафилококковых заболеваний приобретает большое значение.

В природе -- в живом мире, окружающей среде, воздухе -- очень широко распространены болезнетворные (патогенные) и безвредные (непатогенные) разновидности стафилококков.Патогенный стафилококк является санитарно-показательным микроорганизмом воздуха.

Самое трудное и важное в исследовании стафилококка, как патогенного так и не патогенного является, является время для роста культуры. Для того чтобы выделить чистую культуру стафилококка нужно от 2-3 дней.

Цель работы заключается в изучении возбудителя стафилококка и их выявления в микробиологической диагностике.

· Изучить морфологию стафилококков.

· Изучить культуральные свойства стафилококков.

· Изучить биохимические свойства стафилококков.

· Изучить токсинообразование и антигенную структуру стафилококков.

· Изучить устойчивость стафилококков.

· Охарактеризовать патогенез и клинику.

· Охарактеризовать классификацию.

· Проанализировать стафилококк гемолитический.

· Проанализировать стафилококк эпидермальный.

· Проанализировать стафилококк сапрофитный.

· Проанализировать стафилококк золотистый.

· Рассказать о методах лабораторной диагностики.

Историческая справка.

Патогенный стафилококк (Staphylococcus aureus) обнаружен Р. Кохом (1878), выделен из гноя фурункула Л. Пастером (1880), описан как возбудитель многих нагноительных процессов А. Огюстоном (1881), обстоятельно изучен Ф. Розенбахом (1884).Название стафилококк произошло от греческого словосочетания «гроздь винограда».

1. Характеристика стафилококков

Стафилококк - это бактерии семейства Micrococcaceae.

Опасность данных микроорганизмов состоит в том, что они вырабатывают токсины и ферменты, являющиеся патогенными для клеток и нарушающие их жизнедеятельность. Бактерии разрушительно влияют на соединительные ткани, кожу и подкожную клетчатку. Они вызывают ряд опаснейших заболеваний, среди которых - сепсис, токсический шок и другие. Часто именно со стафилококковой инфекцией связывают осложнения после различных болезней.

1.1 Морфологические особенности

Все виды стафилококков имеют шаровидную форму. В разных источника их размер различен. Среднее значение размера от 0,5- до 2 мкм. В мазках их культур располагаются в виде гроздей винограда. В патологическом материале они могут обнаруживаться в виде отдельно лежащих одиночных кокков, диплококков, коротких цепочек. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов стафилококков обнаруживают капсулу. Под действием пенициллина и других веществ стафилококки могут образовывать L-формы. Стафилококки хорошо окрашиваются анилиновыми красками, грамположительны. Являются факультативными анаэробами.

1.2 Культуральные свойства

Стафилококки - аэробы и факультативные анаэробы. Хорошо развиваются на обычных питательных средах при температуре от 10°С до 43°С (оптимум 30-37°С) при рН - 7,2-7,6. Рост возможен и в слабокислой среде. Стафилококки вызывают диффузное помутнение МПБ с последующим выпадением небольшого осадка. Через 2-3 суток на поверхности бульона образуются пленка и пристеночное кольцо. На МПА стафилококки растут в виде выпуклых, с ровными краями колоний диаметром от 1 до 4 мм.

При 20-25°С, доступе кислорода и рассеянном свете стафилококки вырабатывают золотистый, белый, лимонно-желтый, оранжевый и другие пигменты, являющиеся липохромами, каталазоположительны, оксидазоотрицательны. Растут на средах с 5-10% NаС1.

В качестве избирательных сред предложены: желточно-солевой агар, молочно-солевой агар и др. Чаще всего используют среду ЖСА (желточно-солевой агар), позволяющую уже в первичных посевах выявить колонии патогенных стафилококков.

При росте на желточно-солевом агаре вокруг колоний патогенных стафилококков образуются радужные венчики и зоны помутнения. На молочно-солевом агаре колонии стафилококков имеют форму дисков с ровными краями, образующие разнообразные пигменты (золотистый, белый и др.).

Ввиду сходства стафилококков по морфологии и культуральным свойствам, выросшие на питательных средах колонии отвивают на скошенный мясопептонный агар и проводят идентификацию: ставят реакцию плазмокоагуляции (патогенные стафилококки способные коагулировать цитратную кроличью плазму, как правило лизируются фагами), каталазный тест, проводят посевы на углеводные среды с маннитом и др.

Ненадежно также определение патогенных стафилококков по ихспособности давать гемолиз при росте на кровяном агаре. Гемолитическая способность этих микробов колеблется в широких пределах в зависимости от ряда факторов: вида используемой крови, содержание в ней антигоксина, концентрации эритроцитов в агаре, толщина слоя среды и др. Поэтому гемолитический признак на практике не обеспечивает дифференциацию гноеродных (патогенных) стафилококков от сапрофитных видов. Поэтому при санитарно-микробиологических исследованиях учитывают только типичные коагулазопозитивные штаммы гноеродных стафилококков.

Реакция плазмокоагуляции. В пробирку с 0,5 см3 стерильной плазмы крови вносят одну бактериальную петлю агаровой али 0,1 см3 бульонной 18-24-часовой культуры испытуемого микроорганизма, инкубируют при 37°С и учитывают результат через 30 мин, 2,4 и 24 ч. При положительном результате образуется плотный или рыхлый сгусток. Если использовали разведенную плазму, то сгусток плавает в жидкости.

1.3 Биохимический свойства

Стафилококки обладают сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Сахаролитические ферменты расщепляют лактозу, глюкозу, маннит, сахарозу, мальтозу, глицерин до кислоты. Протеолитические свойства стафилококка выражаются в разжижении желатина, казеина и других белковых субстанций.

1.4 Токсинообразование и антигенная структура

Патогенные свойства стафилококков обусловлены способностью вырабатывать экзотоксины и ферменты агрессии. В настоящее время выделяют четыре типа стафилококковых токсинов: альфа (а), бета (b), дельта (d), гамма (у). Они являются самостоятельными субстанциями и вызывают лизис эритроцитов, оказывают летальное и некротическое действие. Эти свойства неодинаково выражены у различных типов токсинов. Наиболее изучены гемолитические свойства токсинов, поэтому их часто называют гемолизинами. Гемолитическую способность стафилококков можно определить при посеве на кровяной агар, на котором через 18--24 ч вокруг колонии стафилококка видна зона гемолиза. Некротическое действие можно установить, вводя культуру стафилококка внутрикожно кролику. Через 24--48 ч на месте инъекции наступает некроз кожи (положительная дермо-некротическая проба). Летальные свойства определяют внутривенным введением 0,2--0,4 мл стафилококкового токсина кролику. Смерть животного наступает через 5--10 мин.

Альфа - токсин наиболее изучен. Относится к истинным токсинам. Разрушает эритроциты кролика и барана, слабо -- эритроциты человека. Термолабилен. Оказывает летальное и некротическое действие. Обладает антигенными и иммуногенными свойствами, легко переводится в анатоксин.

Дельта-токсин в основном продуцируется штаммами стафилококков, выделяемыми из патологического материала от больных. Действует на эритроциты человека и лошади. Вызывает гибель кроликов при внутривенном введении 125 мкг очищенного токсина. Антигенные свойства выражены слабо, не переводится в анатоксин.

Гамма-токсин малоизучен. Вызывает лизис эритроцитов кролика, барана и человека. Термолабилен.

Установлено, что патогенные стафилококки выделяют вещества, губительно действующие на лейкоциты человека и различных видов животных. Эти вещества получили название лейкоцидинов. У стафилококков описано четыре типа лейкощщинов. Они обладают антигенными свойствами. При иммунизации животных можно получить иммунную сыворотку, обладающую способностью нейтрализовать лейкоцитолитическое действие яда.

Патогенные стафилококки способны продуцировать энтеротоксин, который вызывает пищевые отравления. Стафилококковые пищевые интоксикации возникают после приема пищи, содержащей энтеротоксин, выделенный стафилококками при размножении в продукте. Важной особенностью стафилококкового энтеротоксина является его термоустойчивость. Поэтому продукты, содержащие энтеротоксин, даже после термической обработки могут явиться причиной пищевого отравления.

В последние годы у некоторых патогенных стафилококков найден особый экзотоксин, который был назван Стафилококки, выделяющие этот вид токсина, вызывают эксфолиативные поражения кожи (пузырчатка новорожденных, локальное буллезное импетиго, скарлатинозоподобная сыпь).

К токсическим субстанциям относятся выделяемые стафилококками ферменты агрессии:

1) плазмокоагулаза, вызывающая свертывание плазмы крови;

2) гиалуронидаза, расщепляющая гиалуроновую кислоту, которая входит в состав основного вещества соединительной ткани;

3) фибринолизин, растворяющий фибрин;

4) фосфатаза. Кроме того, установлено, что патогенные свойства стафилококков связаны со способностью их продуцировать дезоксирибонуклеазу (ДНК-азу), лецитовителлазу, липазу, лизоцим. Стафилококки могут продуцировать антибиотические вещества -- бактериоцины (стафилоцины). Установлено, что стафилоцины не только подавляют рост других штаммов стафилококков, но и оказывают ингибиторное действие на дифтерийные палочки, а также различные виды бацилл и клостридий.

Антигенная структура - изучена недостаточно. Выделены около 30 полисахаридных типоспецифических антигенов и один общий белковый антиген. К этим антигенам получены агглютинирующие и преципитирующие сыворотки. Однако довольно большое количество культур стафилококков не поддается серологическому типированию.

1.5 Устойчивость во внешней среде

Стафилококк содержится в почке, воздухе, воде и на предметах обихода.

Среди патогенных микробов стафилококки наиболее устойчивы во внешней среде. Они хорошо переносят замораживание, сохраняя при этом жизнеспособность в течение нескольких лет, и высыхание, являясь в дальнейшем источником пылевой (воздушной) инфекции. Прямой солнечный свет убивает стафилококки в течение нескольких часов. При нагревании до 70°С они погибают в течение 1 ч, до 80°С -- через 10--20 мин. Менее устойчивы стафилококки к действию различных химических веществ: 0,1% раствор сулемы и 3% раствор карболовой кислоты убивают их в течение 15--30 мин, 1% раствора хлорамина -- через 2--5 мин. Стафилококки устойчивы к повышенной концентрации хлорида натрия. Поэтому при выделении их из загрязненного материала используют питательные среды с повышенным содержанием NaCl (7--10%). Стафилококки быстро приобретают устойчивость к антибиотикам. Особенно распространены штаммы, устойчивые к пенициллину, так как стафилококки обладают ферментом пенициллиназой. Стафилококки чувствительны к бриллиантовому зеленому.

1.6 Патогенез и клиника

Как уже отмечено, стафилококки широко распространены во внешней среде. Они являются сапрофитами кожи и слизистых оболочек человека. У здоровых людей наряду с не патогенными довольно часто встречаются патогенные стафилококки. Преимущественная их локализация -- слизистая оболочка носа и зева. Установлено, что только у небольшой части людей в организме постоянно отсутствует патогенный стафилококк.

У большинства он имеется периодически, а некоторые лица являются постоянными бактерионосителями. Имеется категория «злостных» носителей, в носоглотке которых постоянно и в большом количестве обитают патогенные стафилококки, устойчивые к антибиотикам, определенных фаготипов и называемые «эпидемическими», так как они часто являются причиной стафилококковых массовых заболеваний в больницах. Такие носители, особенно среди медицинского персонала, а также лица, страдающие стафилококковыми заболеваниями, являются основным источником стафилококковой инфекции в больницах.

Стафилококки играют огромную роль в патологии. Они вызывают самые разнообразные гнойные заболевания: гнойничковые поражения кожи и подкожной клетчатки, ангины, отиты, пневмонии, уретриты, холециститы, энтероколиты, сепсис и др. Особенно велика их роль в акушерско-гинекологической практике и хирургии. Стафилококки являются наиболее частой причиной гнойно- воспалительных заболеваний у новорожденных вплоть до генерализованной инфекции -- сепсиса, маститов у рожениц, гнойных осложнений после операций у хирургических больных. Патологический процесс вызывается, как правило, патогенными стафилококками. Однако у лиц с пониженной сопротивляемостью инфекционный процесс может быть обусловлен непатогенным стафилококком. Стафилококковые заболевания протекают тяжело, с высокой летальностью, особенно у детей раннего возраста и ослабленных больных.

Инфекция передается главным образом контактным путем или через воздух. При некоторых заболеваниях (гнойничковые болезни кожи, ангины и др.) инфекция может быть эндогенной.

Среди стафилококковых заболеваний особое место занимают пищевые интоксикации, возникающие в результате употребления в пищу продуктов (чаще всего молочных, мясных и сладких блюд), в которых произошли размножение стафилококка и накопление энтеротоксина.

Они имеют наибольший удельный вес среди пищевых отравлений микробной природы. Стафилококковые пищевые отравления называют токсикозами, так как характерная клиническая картина (многократная рвота, головная боль, сердечная слабость, иногда понос) обусловлена действием не стафилококка, а его энтеротоксина.

1.7 Классификация

· Стафилококк золотистый (Staphylococcus aureus), как наиболее патогенный для человека. Назван по способности образовывать золотистый пигмент. Может вызывать у человека гнойные воспалительные процессы почти во всех органах и тканях.

· Стафилококк эпидермальный (Staphylococcus epidermidis) -- часто встречается на коже и слизистых оболочках человека, может вызывать сепсис, эндокардит, конъюнктивит, гнойную инфекцию ран и гнойные инфекции мочевыводящих путей.

· Стафилококк сапрофитный (Staphylococcus saprophyticus) -- может вызывать острый цистит и уретрит.

· Стафилококк гемолитический (Staphylococcus haemolyticus)

1.8 Гемолитический стафилококк

Гемолитический стафилококк (Staphylococcus haemolyticus) по статистике, в пятидесяти процентах случаев провоцирует тонзиллит и ангину. Это связано с тем, что в первую очередь поражаются слизистые в дыхательных путях. Раздражение способствует ускорению воспалительного процесса. По мнению специалистов, избавиться от этого микроорганизма полностью практически невозможно. Лечение стафилококка гемолитического направлено на облегчение симптомов. В ходе терапии происходит подавление деятельности патологических бактерий. Следует отметить, что в медицинской практике гемолитический стафилококк менее распространен, нежели золотой. Именно последний является основной причиной возникновения различных гнойных процессов. К патологиям, в частности, относят пневмонии, маститы, отиты. Часто стафилококк вызывает пищевые отравления. Внешне заражение может сопровождаться сыпью.

Клиническая картина заболевания. Стафилококк в носоглотке или миндалинах, как правило, находится в спокойном «спящем» состоянии. Но ряд факторов (переохлаждение, например) могут активизировать его, спровоцировать размножение. Инкубационный период обычно продолжается порядка сорока восьми часов.

За это время микроорганизмы активно расселяются в гортани, распространяются по дыхательной системе. После этого начинают проявляться клинические симптомы патологии. В частности, пациент чувствует боль в горле, которая становится интенсивнее при чихании, глотании, кашле, во время разговора. Также увеличиваются миндалины, вероятно повышение температуры. Пациент может ощущать слабость, недомогание. В районе горла наблюдается покраснение кожи. Кроме того, вероятно развитие осложнений: возникновение отита, скарлатины, воспаления узлов шеи.

Терапия. Облегчение симптомов осуществляется посредством антибактериальных препаратов. Следует, однако, заметить, что микроорганизмы обладают способностью быстро привыкать к медикаментам. В связи с этим при диагностике штамм бактерии должен быть четко определен. Кроме того, в ходе продолжительной терапии целесообразно менять препараты периодически. Часто гемолитический стафилококк активизируется в период беременности. В этом случае медикаменты назначаются в зависимости от срока. Врачи назначают щадящие антибиотические средства. Кроме того, рекомендованы препараты для местного применения, облегчающие симптомы. К таким средствам относят различные капли в нос, полоскания, орошения для горла. После проведения терапевтического курса врач назначает исследование: посев на бактерию. Если даже микроорганизм найден, то это не значит, что имеет место серьезное заболевание. В таких случаях специалисты рекомендуют укреплять здоровье, повышая иммунитет. Во время беременности следует включать в рацион больше овощей и фруктов (свежих), избегать нервных, стрессовых ситуаций, эмоциональных состояний. Не следует забывать о том, что каждый человек подвергается атаке миллионов патологических бактерий. Следует сказать, что гемолитический стафилококк не всегда предполагает прием антибиотиков. В зависимости от стадии патологии врач подберет подходящую терапию.

Сапрофитный стафилококк (Staphylococcus saprophyticus) считается самым мирным, и редко поражает детей. Основное его место обитания - это стенка мочевого пузыря и кожа вблизи гениталий, поэтому нетрудно догадаться, что он является возбудителем цистита, которому больше подвержены женщины.

И хотя по статистике, данный микроорганизм обнаруживается у 5% обследованных, далеко не у всех он вызывает какие-либо заболевания. Если у человека крепкий иммунитет, то он является только носителем стафилококка. Если же защитные функции организма ослаблены, то бактерия начинает активно размножаться, что проявляется стандартными симптомами цистита:

· нарушение мочеиспускания (недержание мочи и частые позывы);

· болезненность мочеиспускания;

· жгучие боли в промежности и зуд;

· возможны общие интоксикационные симптомы, такие, как головокружение, слабость, тошнота и др., но они тревожат не так часто.

В редких случаях сапрофитный стафилококк может вызвать воспаление в почках, и наряду с циститом нужно лечить пиелонефрит.

2. Лечение стафилококка

Лечение стафилококка сапрофитикуса сводится к употреблению показанных антибиотиков, не говоря о само собой разумеющемся симптоматическом лечении, предусматривающем спринцевание, теплые ванны и употребление фитопрепаратов. Однако к курсу антибиотиков нужно отнестись максимально серьезно, и пропить его до конца, даже, если болезненные симптомы уже перестали тревожить.Угнетение стафилококка приводит к усилению интоксикационных бактерий ввиду того, что организму нужно выводить погибшие микроорганизмы и токсичные продукты их жизнедеятельности.При разовом употреблении антибиотиков, убивается большая часть стафилококка, и оставшиеся микроорганизмы уже не могут размножаться и «атаковать» с той же силой, из-за чего пациент чувствует облегчение. Однако если бросить прием антибиотиков, то возможен скорый рецидив заболевания, который будет вылечить куда сложнее.

Дело в том, что оставшиеся стафилококки становятся резистентными, т.е. устойчивыми к данному медикаменту, и необходимо уже применение более сильных средств с возможными системными побочными эффектами. Кроме того, каждая последующая мутация стафилококка лишь увеличивает его способность к выживанию в самых тяжелых условиях.

Лечение сапрофитного стафилококка при беременности.

Особенно ярко данный вид бактерии проявляется во время беременности, поскольку этому способствуют ослабленный иммунитет, измененный гормональный фон и подверженность разным стрессам. В принципе, проявившись в виде слабого цистита, порой можно обойтись и симптоматическим лечением. Однако если женщина находится в группе риска, т.е. болела тяжелым циститом или даже пиелонефритом до беременности, необходимо начинать полное лечение щадящими антибиотиками.

На третьем триместре они не настолько опасны для малыша ввиду сформировавшейся плаценты, способной отторгать патологические воздействия. А вот вредоносное распространение стафилококка может оказаться куда опаснее, поэтому при появлении первых симптомов цистита нужно пройти обследование у квалифицированного специалиста.

Эпидермальный стафилококк.

Эпидермальный стафилококк (Staphylococcus epidermidis) в отличие от «золотистого стафилококка» является представителем нормальной микрофлоры кожи человека, поэтому вреда здоровому человеку он практически не способен принести. Развивается в основном у ослабленных истощенных людей, при дисбактериозе, беременных женщинах, и тех которые недавно перенесли операции или находятся в отделениях реанимации. Микроб проникает в организм через раны, сосудистые и мочевые катетеры, дренажи. В связи с этим может возникнуть заражение крови или воспаление внутренней оболочки сердца (эндокардит). Поэтому эпидермальный стафилококк служит главным наказанием для многих хирургов, занимающихся внутренним протезированием. Так как если сосуды и искусственные клапаны инфицируются, то именно этим микробом.

Инфицирование при имплантации длительное время обычно проходит в скрытом характере. У больных с нейропенией происходит развитие массивной бактериемии с тяжелой интоксикацией, которая может привести к смерти. Инфицирование сосудистых имплантатов приводит к развитию ложных аневризм, что впоследствии может также угрожать жизни пациента.

У женщин при инфицировании эпидерминальным стафилококком поражаются мочеиспускательные каналы, вызывая при этом воспаление поверхностных тканей. Сначала появляются неприятные боли в области живота, температура тела доходит до 40 градусов, самочувствие ухудшается, могут появиться различные высыпания на коже в виде прыщей. При осложнении необходима срочная госпитализация. Но прежде врач должен провести полную диагностику заболевания, далее учитывая силу воздействия стафилококка, назначает курс -- вспомогательных медикаментов (ферменты, витамины и другие).

Лечение эпидермального стафилококка.

Самый лучший способ для предохранения от болезни -- это соблюдение личной гигиены. Лечение стафилококковых болезней - довольно сложная задача, так как нет такого микроба, чтобы мог сравниться по способности к выработке устойчивости к антибактериальным средствам и антибиотикам. Применение пенициллина доказало этот факт. Из этого следует вывод, что применение антибиотиков совсем необязательно, о чем говорит случай связанный с пищевым отравлением. Данная стафилококковая болезнь в антибиотиках не нуждается, так как здесь в большей степени играет роль не микроб, а его токсины.

В настоящее время новые бактериологические методы позволяют не только обнаружить эпидермальный стафилококк, но и определить чувствительность к лекарствам. На основании таких методов врач назначает соответствующую терапию.

Печально то, что перенесенная инфекция не оставляет за собой длительного иммунитета. Совсем скоро при ослабленной иммунной системе человек снова может заболеть. К токсинам одного стафилококка появляются антитела, которых организм еще не в состоянии определить.

Золотистый стафилококк.

Чаще всего золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)образуется в носовых проходах, подмышечной области. Хроническими переносчиками являются работники медицинских учреждений, больные атопическим дерматитом, наркоманы.

У здоровых людей основной пристанью стафилококка является полость носа. Хотя может быть и такое, что они обитают в гортани, промежностях, подмышечной области, желудочно-кишечном тракте и волосяной части головы.

20 % детей до 2х лет жизни могут быть носителями золотистых стафилококков. Инфекция поселяется в носовой полости. Уже в возрасте от 4х до 6ти лет это проявляется у 30-50 % детей. У взрослых же процент носителей колеблется от 12% до 50%.

Пройдя госпитализацию, процент пациентов колеблется в пределах 20ти-30ти. Это больше относится к тем пациентам, которые принимали антибиотики, болеют диабетом или какими-либо инфекционными заболеваниями или находятся на гемодиализе. В стационарах штаммы золотистых стафилококков берут ответственность за гнойные воспаления и раневые инфекции. Причиной раневых инфекций могут быть стафилококки в носовых проходах.

Среди работников больниц и поликлиник процент работников, которые являются переносчиками золотистого стафилококка, достигает 35%.

После первой менструации у женщин, в 5-15ти процентах случаев, может появиться стафилококк. Во время менструаций этот процент увеличивается и может достигать до 30% женщин.

Некоторые штаммы выработали стойкость к антибиотикам, таким как цефалоспорины и пенициллины (оксациллин, нафциллин, диклоксациллин, метициллин). Их ещё называют метициллин-резистентые золотистые стафилококки. И каждый год число таких штаммов растет. Подхватить заразу можно в любом общественном месте. Смертность от него составляет 30 %.

Выявление стафилококка.

Выявить количество золотистого стафилококка можно с помощью анализа кала на дисбактериоз. Проверку проходят при подозрениях, в родильных домах, при периодическом обследовании медицинского персонала. Поскольку золотистый стафилококк - единственный коагулаза-положительный патогенный стафилококк, то проверка проводится тестом на коагулазу.

Степени золотистого стафилококка.

В медицине считается нормой, если выявился стафилококк 4й степени по результатам анализов, такой результат требует минимального лечения.

В него входят профилактические действия, поддержание иммунитета, избавление от авитаминоза.

Выявленные стафилококки 10 в 4 степени не являются очень опасными, но тем не менее лечение требуется, тем более, что вылечить золотистый стафилококк вылечить наиболее тяжело, в отличии от других. Во-первых, следует не допустить привыкание к антибиотику, который назначит исключительно врач, во-вторых, в тонусе нужно держать иммунную систему, что повлечет за собой восстановление микрофлоры в организме. Курс лечения должен быть пройден до конца, иначе оставшиеся золотистые стафилококки выживут и станут неуязвимые для данного лечения.

Симптомы золотистого стафилококка.

Золотистый стафилококк вызывает гнойные и воспалительные процессы не только на коже, но и на различных органах, проявляется в виде прыщей, фурункулов, карбункулов, сыпи, гнойного мастита на груди кормящей матери. Если инфекция попадает на слизистую носоглотки, то возможно это будет причиной развития ангины, синусита, отита и других заболеваний дыхательных верхних путей. Если инфекция попадет в легкие новорожденного, то это может вызвать сильнейшую пневмонию, при поражении костей вызовет остеомиелит, почек -- пиелонефрит сердца - эндокардит, и этот список можно продолжать. Самое страшное, что может произойти, это заражение крови, что приведёт к сепсису. Это может быть пупочный сепсис, пузырчатка, что ещё называется «синдромом ошпаренных младенцев», то есть широкое гнойное поражение кожи.

Если стафилококк попадает в кишечник, то это проявляется в нарушении работы ЖКТ, происходит отравление. Иммунитета к болезни не формируется, поэтому нужно быть аккуратным при повторном заражении.

Признаки, свидетельствующие о поражении стафилококковой инфекцией:

· Помимо фурункулов, прыщей и других различных нарушениях на коже, могут быть воспаления, похожие на скарлатину. Это говорит о внутреннем поражении организма, об остеомиелите, например, сепсисе. Нужно быть аккуратным со злокачественным сепсисом, так как это может привести даже к сепсису мозга.

· Течение проходит остро и быстро, происходит сильная лихорадка, могут развиваться отдышка, гиперемия, тахикардия. Не исключена пневмония.

· На груди кормящей матери может возникнуть гнойный мастит. В таком случае кормление останавливают.

· На 5-6 сутки резко повышается температура и кишечное отравление.

· Если проявляется ангина, вызванная стафилококком, то она выглядит как стрептококковая, но пенициллином не лечится.

· Продолжительный сепсис

· Токсический шок

Лечение золотистого стафилококка.

Задача это очень сложная, но реальная. Нужно набраться терпения и не запускать. После того, как будет сдан анализ на антибиотиков чувствительность, врач должен назначить комплексное лечение. Лечение проводит врач-дерматовенеролог. Применяют обычно сульфаниламидные препараты и антибиотики. Так как именно золотистый стафилококк имеют такую особенность, что вырабатывает устойчивость к антибиотикам, поэтому лечение - задача не простая, тем более, если поражение организма случается не в первый раз.

После пройденного курса лечения, анализы сдают повторно, и если произошло полное выздоровление, то лечение прекращается. Если имеется стафилококк 4 степени, то нужно пройти профилактические меры, устранить авитаминозы, соблюдать правила личной гигиены, избегать травматизма и следить за потливостью.

Лабораторная диагностика.

Методы исследования:

1. Микроскопический

2. Бактериологический

Материал для исследования:

1) Гной- при фурункулах, карбункулах, абсцессах;

2) Слизь из зева - при ангинах;

3) Мокрота- при пневмониях;

4) Моча при циститах;

5) Дуоденальное содержимое - при холециститах;

6) Кровь - при подозрении на сепсис;

7) Промывные воды желудка, остатки пищи при подозрении на пищевые отравления;

8) Раневое отделяемое.

Микроскопический метод приминается как фрагмент бактериологического.

Бактериологический метод исследования.

Первый день.

Биоматериал, взятый у пациента поступает в микробиологическую лабораторию.

Далее биоматериал засевают на ЖСА (желточно-солевой агар), МСА (молочно-солевой агар) и кровяной агар. Ставят в термостат при 37С на 24 часа. При подозрении на сепсис кровь в количестве 10-15 мл засевают во флаконы с сахарным бульоном 1:10 в среду Китт-Тароцци для выделения анаэробного стафилококка, ставят в термостат на 24 часа при температуре 37С. В течении 20 суток производят высевы на кровяной агар.

Второй день.

Изучение культуральных свойств:

a) на ЖСА патогенные стафилококки - вокруг колонии образуется помутнение в виде радужного (перламутрового) венчика, т.к лецитовителаза стафилококка расщепляет лецитин питательной среды;

b) на МСА - колонии по цвету желтые, лимонно-желтые или белые.

c) на КА зоны гемолиза.

Подозрительные колонии пересевают на МПА (мясо-пептонный агар) для выделения чистой культуры.

Третий день

1. Определяют чистоту выделенной культуры - окрашивают препарат по Граму - стафилококки в мазке - Гр+ кокки, располагаются в виде гроздей винограда.

2. Определяют патогенные свойства:

а) с чистой культуры ставят реакцию плазмокоагуляции, для этого цитратную кроличью плазму разводят 1:5 физиологический раствором, затем наливают по 0,5 мл в 2 пробирки, в опытную пробирку бактериологической петлей внося чистую культуру стафилококка, вторая пробирка контрольная (без посева). Учет реакции производят через 2,6 и 18 часок (патогенный стафилококк продуцирует фермент коагулазу и вызывает свертывание плазмы - осадок в виде желе, в контрольной пробирке коагуляция не происходит);

б) посев на ЖСА - учет перламутрового венчика;

в) посев на МПА с 1 % маннитом - производится укол в столбик;

г) посев на КА - для выявления гемолитических свойств.

3. Фаготипировение - для выявления источника инфекции. Для этого используют 20 типовых фагов. Дно чашки Петри делят на 20 одинаковых квадратов. В чашку Петри заливают МПА с глюкозой. Чистую культуру стафилококка засевают сплошным газоном и в каждый квадрат вносят типовой фаг. Ставят в термостат при 37С на 24 часа.

4. Посев культуры на МПА - для определения культуральных свойств.

5. Посев культуры стафилококка сплошным газоном для определения чувствительности к антибиотикам.

Четвертый день.

Учет результатов и идентификация выделенной культуры:

1. Реакция плазмокоагуляции - положительна;

2. На ЖСА - перламутровый венчик вокруг колонии;

3. Расщепление маннита в анаэробных условиях (изменение цвета среды);

4. На КА вокруг колонии зона гемолиза;

5. Лизис бактерий в соответствующем квадрате с фагом;

6. Диффузное помутнение на МПБ;

7. Определение зоны задержки роста - учет чувствительности к антибиотикам.

Выдача ответа: Выделен стафилококк золотистый (патогенный).

Заключение

патогенный токсин стафилококковый клинический

Несмотря на то, что стафилококки принадлежат к числу наиболее легко обнаруживаемых и распознаваемых микроорганизмов, не требующих сложных диагностических приемов для их выявления, в практической работе микробиологи до сих пор испытывают определенные трудности при установлении их причинной роли в ряде различных заболеваний. С одной стороны, присутствие патогенных стафилококков, обнаруживаемое в исследуемом материале, не всегда является убедительным доказательством их этиологического значения. С другой, учитывая большое разнообразие проявлений биологической активности этих микробов, зависящее от разных, не всегда поддающихся учету факторов, широкую их изменчивость под влиянием лекарственных веществ и самого макроорганизма, довольно сложно бывает определить их потенциальную патогенность.Наконец, третья причина связана с тем, что стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры из группы условно патогенных микроорганизмов и, наряду с непатогенными, патогенные представители обитают в организме людей, распространяясь при этом весьма неравномерно на разные участки человеческого тела.

Список используемой литературы

1) Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии К.С. Камышева.

2) Медицинская микробиология - Поздеев Оскар Кимович.

3) Медицинская микробиология учебное пособие - А.М. Корлюка.

4) Микробиология - Ф.К. Черкес, Л.Б. Богоявленска.

Размещено на Allbest.ru

...

Щелочная фосфатаза

Более 20% штаммов

5-10% штаммов

95-100% штаммов

S. saprophiticus

Виды и пути передачи стафилококка. Клинические проявления факультативных анаэробов. Современные методы диагностики заболевания. Современный подход к лечению стафилококковых инфекций. Укрепление иммунитета человека, соблюдение санитарно-гигиенических норм.

презентация , добавлен 22.10.2014

Этиология и патогенез исследуемого заболевания, общее описание возбудителя и механизм его действия внутри человеческого организма. Клиническая классификация и формы протекания, предпосылки развития. Диагностика и построение схемы лечения, прогноз.

презентация , добавлен 17.02.2015

Понятие лептоспироза - инфекционного заболевания, вызывающего поражение кровеносных капилляров, печени, почек, мышц. Морфология и тинкториальные свойства лептоспироза, эпидемиология, патогенез и клиническая картина. Методы микробиологической диагностики.

презентация , добавлен 03.05.2015

Лейкозы - заболевания опухолевой природы. Их классификация в зависимости от морфологических свойств опухолевых клеток. Причины возникновения заболевания, его клиническая картина, стадии протекания. Анализы и обследования, специфика лечения заболевания.

презентация , добавлен 31.10.2012

Понятие лептоспироза, его возбудитель. Морфология и тинкториальные свойства, культивирование и антигенная структура. Эпидемиология и патогенез болезни, ее клиническая картина и микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение лептоспироза.

презентация , добавлен 25.05.2015

Микробиологическая характеристика возбудителя чумы. Пути передачи инфекции. Клиническая картина заболевания. Эпидемиологические особенности чумы. Описания трёх пандемий чумы, которые прошли в течение двух последних тысячелетий. Чума в современном мире.

реферат , добавлен 18.09.2013

Виды стафилококка: золотистый, эпидермальный, сапрофитный и гемолитический. Высокая устойчивость бактерии к высушиванию, замораживанию, действию солнечного света и химических веществ. Пути передачи возбудителя и основные клинические проявления болезни.

презентация , добавлен 13.11.2014

Определение понятия "эндометриоз". Участие в механизме заболевания клеточных ферментов, рецепторов к гормонам, а также генных мутаций. Этиология, патогенез, классификация и клиническая картина генитального эндометриоза. Диагностика и лечение заболевания.

презентация , добавлен 23.09.2014

Анатомия и физиология, определение понятия "острый аппендицит", типичная клиническая картина заболевания. Клиническая характеристика острого аппендицита: диагностика, симптоматика и возможные осложнения. Особенности диагностирования и протекания болезни.

презентация , добавлен 08.11.2013

Выделение возбудителя в начальном периоде болезни при микробиологической диагностике, исследование крови, изучение колоний на дифференциальной среде. Исследование дуоденального содержимого с диагностической целью, при обследовании на бациллоносительство.

100 р бонус за первый заказ

Выберите тип работы Дипломная работа Курсовая работа Реферат Магистерская диссертация Отчёт по практике Статья Доклад Рецензия Контрольная работа Монография Решение задач Бизнес-план Ответы на вопросы Творческая работа Эссе Чертёж Сочинения Перевод Презентации Набор текста Другое Повышение уникальности текста Кандидатская диссертация Лабораторная работа Помощь on-line

Узнать цену

Стафилококкозы в стационарах 40-60%

В настоящее время род Staphylococcus уже к семейству Micrococcaceae не относится (с начала 90-х годов). Семейства Micrococcaceae не существует (т.к. генетического родства между его составляющими нет). Объединялись лишь по признаку грамположительных аэробных и факультативно-анаэробных кокков, делящихся в нескольких плоскостях.

Micrococcus - генетически родственник актиномицетов.

Staphylococcus – генетически родственник клостридий.

При исследованиях на фузобактерии, правотеллы, бактероиды (строгие анаэробы) на бескислородной среде если не применять среду с антибиотиками (аминогликозиды), то стафилококки (да и энтеробактерии) забьют всё!!!

Метод истощающего посева

Стафилококки – факультативные анаэробы. Micrococcus – строгие аэробы

Дифференциация – тест с аэробным и анаэробным расщеплением глюкозы. Все Staphylococcus глюкоза+ без газа под вазелиновым маслом. Micrococcus – нет.

Staphylococcus – более 30 видов, с подвидами – 44. Дифференцируются они по 33 тестам.

Граница галотолерантности – среда с 7,5 и более % NaCl.

Micrococcus – на 6,5% ещё растут, а выше – только Staphylococcus. (ЖСА – 10% NaCl). Некоторые виды 15% NaCl.

Молочно-солевой агар –растут микрококки, т.к. там NaCl ниже.

У буржуев – среда Чапмена - маннитолово-солевой агар (1% маннита)– 7,5% NaCl. Маннитол=маннит, как глицерол=глицерин

Целенаправленное выделение Staphylococcus (например при санитарно-бактериологических исследованиях). Зона пожелтения за счёт образования кислоты. Как его альтернатива у нас – ЖСА.

Т.е. если выделяем кокки на среда с ≥ 7,5 NaCl то они всегда глюкозо+, т.к. это Staphylococcus, а Micrococcus не растут

Морфология микрококков чуть отличается от стафилококков – и колонии и клетки крупнее , чем у стафилококков.

У каждого человека на коже 7-10 видов микрококков (а всего около 15 видов), М. luteus – преобладает - крупные желтые колонии на неингибиторных средах(старое название – воздушные сарцины, истинные сарцины в аэробных условиях не растут!!!). Равномерно красятся по Граму. В виде кучек, тетрад, пакетов. Другие – белые, бесцветные и т.п. M.livi – эмалево-белые. M.cristi - красные колонии.

Стафилококк по Граму окрашивается неравномерно (ситцевость окраски). Гроздья – чаще дает S. aureus, а так кучки, тетрады, пакеты и т.п. Стафилококки с жидкой стеды – одиночные, пары, кучки.

На средах без желтка пигмент S. aureus не образуется и колонии бывают серыми.

Каротиноиды в воде не растворяются и среда вокруг колонии никогда не окрашивается у Staphylococcus и Micrococcus.

Ангелина Гесс – в середине 19 века ввела агар в среды

Micrococcus тоже УПМФ – сепсис. In vitro чувствителен ко всему. У животных пенициллин – 5 единиц на инъекцию – на уровне изобретения пенициллина – лечит сепсис. Но in vivo лечить очень трудно. Сепсис у больных с сердечным шунтированием. Если попадают в аппарат искусственного кровообращения.

Planococcus – нас не интересуют – в морской воде и человеку не опасны

Стоматококки – 1 вид. Хорошо растут на КА (на КА вообще вырастает что угодно), но на солевых средах они не растут. Особенного клинического значения не имеют. УПМФ. Очень редко вызывают гингивиты и стоматиты (но чаще эти заболевания вызывают анаэробы и вирусы).

S. aureus subsp. aureus

S. aureus subsp. anaerobius - в аэробных условиях не растет (строгий анаэроб)

Среди стафилококков нет сапрофитов – все условно-патогенные . Более 86 нозологических форм заболеваний.

S. aureus и S.epidermidis – по 45 % всех стафилококкозов. Пищевые отравления - только S. aureus (S.epidermidis – может вызывать лишь у грудных детей). Энтеротоксины продуцируют только S. aureus.

У каждого человека 10-12 видов стафилококков живет на коже.

Передние отделы носа – главный биотоп. Там больше всего на единицу площади.

S. epidermidis также может, наряду с S. aureus вызывать вспышки ВБИ.

У новорожденных: конъюнктивиты S. epidermidis раньше в Москве в 70-х годах; госпитальные пневмонии S. epidermidis сейчас.

Плазмиды передаются со скоростью около 2 часов (2 часа стафилококк побыл на коже другого человека и получил новую плазмиду).

Носительство .

В родовспомогательных учреждениях плановое исследование на стафилококк не проводится (только при вспышках) – 345 приказ. У хирургического профиля – 720 приказ до сих пор (нигде в мире не проводится). Количество стафилококковых инфекций одинаково и у «буржуев» и у нас, независимо от санации.

По тест-системам можно дифференцировать до 12-15 видов стафилококков и несколько видов микрококков.

691 приказ – по роддомам отменен. Новый 345 приказ не имеет бактериологической части, поэтому по бактериологии все до сих пор ориентируются по 691 приказу.

Плановое обследование на носительство стафилококка отменено.

Коагулазоположительных стафилококков сейчас 5 видов.

коагулаза		мальтоза	хлопьеобразование	Гемолиз на КА с кровью человека
	Ч/з сутки			Почти 100%
			± менее 50%

Ч/з ночь

S. aureus не дает коагулазу очень редко – при первичных посевах от больного с массивной антибиотикотерапией. Поэтому пересеваем на косяк и потом снова ставим плазму. Если нет – это не S. aureus.

Пигмент на средах с повышенным содержанием белка и свет (ЖСА, сывороточная среда с белком)

Среди коагулазоотрицательных стафилококков некоторые тоже могут образовывать пигмент. S промагенес – на любой среде образует желтый пигмент

Ацетоин=ацетилметилкарбинол – реакция VP (Фогес-Проскауэра)

Среда Гиса с глюкозой полужидкая. При посеве с солевой среды всегда глюкозоположительны, по крайней мере, в верхней части столбика.

Окончательный отрицательный ответ по полужидкой среде Гиса с глюкозой выдаётся только на 5-е сутки.

Если газ – предполагаем, что микст или вообще не стафилококк.

Полужидкая среда с маннитом исключена в 1974 году – окончательный отрицательный ответ только на 5-е сутки. Ставится только на чашке – ответ наутро.

Плотная среда с глицерином (1%) (может заменяться любым сахаром и спиртом). Жидкие и полужидкие среды для дифференциации внутри родов Staphylococcus и Micrococcus не используются никогда. Индикатор –бромтимолсиний, рН – нейтральный; или бромкрезолкрасный, бромтимолкрасный. Сеем бляшками – до 10 культур на чашку. Радиальной полосой – до 6 культур на чашку. Вокруг стафилококка – пожелтение. Микрококки глицерин не утилизируют.

S. aurecularis на тест-системах он на 95-99% даёт аналогичность S. aureus и только по реакции плазмокоагуляции его можно отличить.

Коагулазоотрицательные стафилококки

При определённых условиях могут давать пигмент.

У стафилококков по 1-2 тестам дифференциацию до вида провести невозможно.

Растет в плазме в виде хлопьев Маннит+ всего 6-7 видов.

У 100% S. aureus гемолитическая активность.

S. saprophiticus встречается очень редко. Циститы и уретриты у женщин молодого возраста – чувствителен к антибиотикам и химиопрепаратам

Коагулазонегативные не могут стать коагулазоположительными.

S. epidermidis никогда не бывает коагулазоположительным, что бы не было написано в 720 приказе

Неспоровая клетка может прожить 10-12 дней.

Щелочная фосфатаза характерна только для S. epidermidis.

Щелочная фосфатаза – паранитрофенолфосфат или фенолфталеинфосфат из тестов на ЩФ в биохимии– 50 мг на 100 мл агара до 20 штаммов на чашку.

Паранитрофенолфосфат → паранитрофенол (желтый) и окраска среды в лимонно-желтый цвет.

Фенолфталеинфосфат → фенолфталеин (бесцветный). Защелачиваем 3-10% р-ром аммиака (капаем на крышку чашки) Колонии малиновые.

Можно купить 10% р-р фенолфталеинфосфата. Хранится в холодильнике годами. 0,5 мл р-ра на 100 мл агара.

S. epidermidis природно чувствительны к новобиоцину.

Лецитовителаза (желточный фактор) – в международной классификации не используется, только у нас.

20-25% S. epidermidis лецитиназопозитивные.

На 80% S. aureus – человеческого происхождения – дают лецитовителазу. Лецитиназонегативные S. aureus – от животных.

Другие стафилококки тоже могут давать. Т. е. Если лецитовителаза+, то это на 80% S. aureus, на 20% другие стафилококки.

Чашки ЖСА на просвет – зона просветления (протеаза) – нам она не важна.

Помутнение – преобладают липазы – также не важны.

Буржуйские кровяные среды – из эритроцитов барана. Считалось, что человеческие штаммы S. aureus продуцируют только α-гемотоксин, но сейчас есть и β-гемотоксин. Это можно разобрать только на эритроцитах барана.

β-гемотоксин даёт зону неполного гемолиза через сутки, а если затем поставить до конца рабочего дня в холодильник – то зона полностью просветлеет.

S. aureus продуцирует 2 фермента

1) термолабильная ДНКаза (нуклеаза) – она есть у всех стафилококков и у большинства других микробов.

2) Термостабильная ДНКаза (нуклеаза) – есть только у S. aureus. Не разрушеется при кипячении и даже кратковременном автоклавировании.

И по нашим приказам определяется только термолабильная ДНКаза (смысла нет).

В прогретой пище (при скрытии факта ПТИ) стафилококк разрушается, а токсины остаются. По наличию термостабильной ДНКазы можно определить, был ли S. aureus.

По приказам высокополимеризированную ДНК 1-2 мг на 1 мл среды (рН=8,0). Посев на чашку бляшками (или уколом). 24 часа. Проявляем, заливая чашку 3N HCl, образуется преципитат ДНК с HCl и где ДНКаза сработала – видим зону просветления. У S. aureus радиус её 10-12 мм, у S. epidermidis её радиус 4-5 мм. Вокруг лунки с убитой культурой S. aureus – 7-8 мм.

S. epidermidis образует только термолабильную ДНКазу, S. aureus – обе ДНКазы – зона больше.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus - факультативно анаэробные грамположительные кокки, неподвижные, каталазо- и коагулазоположительные. Некоторые штаммы S. aureus продуцируют стафилококковые энтеротоксины (SEs), вызывающие пищевые отравления. Стафилококки присутствуют в воздухе, пыли, сточных водах, воде, молоке, продуктах питания, а также на оборудовании пищевых производств, на различных поверхностях в окружающей среде, на кожных покровах людей и животных. Именно люди и животные являются основным резервуаром инфекции. Стафилококки присутствуют в полостях носа, и горле, а также на волосах и кожном покрове по крайней мере у 50% здоровых людей. Staphylococcus aureus способен расти в широком диапазоне температур от 7 до 48,5°С (оптимум 30 - 37°С); рН 4,2 - 9,3 (оптимум рН 7,0-7,5) и при высокой концентрации хлорида натрия (до 15% NaCl). Такие свойства позволяют бактериям заселять самые разнообразные продукты. Продукты, наиболее часто являющиеся причиной стафилококковых пищевых отравлений - это мясо и мясопродукты, мясо птицы, яйца, салаты (содержащие яйцо, тунец, курицу, картофель, макароны), кондитерские изделия (например, пирожки с кремом, шоколадные эклеры), начинка сэндвичей, молоко и молочные продукты. Таким образом, продукты, которые в процессе приготовления значительное время обрабатыватся вручную и впоследствии хранятся в тепле, могут быть реальным источником стафилококковых пищевых отравлений.

Интоксикация при стафилококковой инфекции

Причиной болезни являются продуцируемые Staphylococcus aureus токсины, поэтому заболевание характеризуется очень коротким инкубационным периодом - обычно от 0,5 до 6 часов. Восприимчивость больного к токсинам определяется состоянием больного, концентрацией токсина и количеством съеденного зараженного продукта. Инфекционная доза может быть менее 1,0 мкг, что соответствует примерно 100.000 КОЕ/г продукта. Наиболее распространенными симптомами заболевания являются тошнота, рвота, отвращение к пищи, спазмы в животе и диарея. Период реабилитации занимает, как правило, 1-3 дня, но в тяжелых случаях полное восстановление может занять больше времени. Болезнь не передается окружающим, больным необходимо принимать большое количества жидкости.

Патогенность, масштабы заболевания

Коагулозоположитепльные стафилококки - это грамположительные каталазоположительные микроорганизмы, которые образуют типичные колонии на селективно-диагностической питательной среде, дающие положительную реакцию на коагулазу (S. аureus; S. aureus spp. anaerobius) или специфическую для кроличьей плазмы реакцию на агаре с кроличьей плазмой и фибриногеном при определении стандартным методом. Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) - это коагулозоположительные стафилококки, образующие ацетоин и ферментирующие мальтозу в аэробных условиях в процессе определения этих биохимических тестов стандартным методом.

Согласно недавним исследованиям в развитых странах из всех известных инфекций чаще всего к смерти приводит одна из самых известных, «обыкновенных» бактерий - Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк; все штаммы стафилококков, продуцирующие коагулазу, называют золотистыми ). Этот условно-патогенный микроорганизм выделяют у 15-30% здоровых людей, причем носительство у большинства из них ограничено несколькими месяцами. При дефиците иммунитета у больного возбудитель является причиной многочисленных, опасных для жизни зооантропонозных инфекций. Самая распространенная токсическая стафилококковая болезнь - это пищевое отравление. Многие штаммы золотистого стафилококка продуцируют энтеротоксин. Этот яд вызывает диарею, рвоту, боли и спазмы в животе. Согласно проведенного в Новой Зеландии исследования 8,6% детей, госпитализированных с сепсисом, вызванным Staphylococcus aureus, умирают. Дерматовенерологи многих стран обеспокоены увеличением количества стафилококковых инфекций и смертельных случаев из-за стафилококка. Бактерии вызывают порчу пищевых продуктов, включая и так называемые «непортящиеся» продукты. Размножаясь, например, в твердом сыре и салями, бактерии выделяют токсины. Именно они являются наиболее частой причиной серьезных пищевых отравлений. При кулинарной обработке стафилококк гибнет, но его термостабильные токсины не разрушаются. Стафилококки являются причиной множества болезней человека, включая сердечные (эндокардит и перикардит), опорно-двигательного аппарата (остеомиелит и инфекционный артрит). На коже и в мягких тканях стафилококк вызывает так называемый синдром шелушащейся кожи и целлюлиты , являющиеся наиболее частыми инфекционными болезнями кожи. По данным ВОЗ золотистый стафилококк возглавляет список бактерий, которыми наиболее часто заражаются в медицинских учреждениях. Высок риск инфицирования стафилококком при использовании внутривенных катетеров и других медицинских устройств, контактирующих с внутренней средой организма. Фактором риска является и искусственная вентиляция легких. Инфицирование стафилококком может также происходить при нарушении обычных правил гигиены в больницах. Всего на S. аureus приходится около 30% всех «госпитальных инфекций». Стафилококки, выжившие в условиях постоянного применения дезинфицирующих средств и использования антибиотиков - серьезнейший фактор риска для персонала, основа госпитальной инфекции.

Таксономия

Стафилококки - род шаровидных неподвижных аспорогенных грамположительных хемоорганотрофных факультативно-анаэробных или аэробных бактерий из семейства Micrococcaceae. В роду Staphylococcus выделяют около 30 видов, при этом 14 обнаружены на коже и слизистой человека, включая S. aureus , S. epidermidis, S. saprophyticus . Для видовой идентификации используют, в основном, 3 теста: продукцию плазмокоагулазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. Антигенная структура бактерии сложная, видоспецифичными антигенами являются тейховые кислоты.

Морфология бактерий и колоний

Бактериальные клетки диаметром 0,5-1,5 мкм делятся в нескольких плоскостях несимметрично, образуя скопления, напоминающие гроздья винограда. Встречаются одиночные клетки, пары и тетрады. Клеточная стенка содержит пептидогликан и глицеринтейховую кислоту. Стафилококки формируют гладкие колонии, окрашенные каротиноидами в желтый или оранжевый цвета. Однако пигментирование не является видовым признаком. При росте на желточно-солевом агаре образуются мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета. При культивировании в жидких средах бактерии вызывают их равномерное помутнение, а затем образование рыхлого осадка, превращающегося в тягучую массу.

Физиолого-биохимическая характеристика

Стафилококки - факультативные анаэробы, но быстро и обильно растут при наличии кислорода. Хемоорганотрофы с окислительным и ферментатиывным метболизмом. Биохимичесчки очень активны. Продуцируют каталазу, на среде с глюкозой в анаэробных условиях большинство штаммов образуют ацетоин (положительная реакция Фогеса-Проскауэра). Выделяют аммиак при росте на аргениновом бульоне, восстанавливают нитраты до нитритов или молекулярного азота, активно гидролизуют белки, в аэробных условиях расщепляют многие углеводы до уксусной кислоты и углекислого газа. Родовым признаком является ферментация глюкозы в анаэробных условиях, что отличает стафилококки от микрокков. Бактерии растут на основных средах при 37°С (оптимум 35-40°С), но могут расти и в более широком интервале температур (6,5÷46°С). Оптимум роста отмечен при рН 7,0-7,5, но возможен рост в диапазоне рН=4,2÷9,3. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективным субстратом для них служат среды с высокой концентрацией хлорида натрия - желточно-солевой или молочно-солевой агар. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя при этом вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 часов. Довольно устойчивы к нагреванию: при 70-80 о С погибают за 20-30 мин, при 150 о С - за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 часа. Бактерии устойчивы к действию низких температур, повторное замораживание и оттаивание их не убивает. Менее устойчивы стафилококки к действию дезинфектантов (перекиси водорода и др.), но резистентны к воздействию чистого этанола. При выращивании в аэробных условиях бактерии нуждаются в аминокислотах и витаминах, в анаэробных - требуют дополнительно урацил и дополнительные источники углерода. На кровяном агаре могут образовывать несколько видов гемолизинов - веществ, поражающих эритроциты, лейкоциты и другие клетки. Продуцируют также фибринолизин, фосфатазу, бактериоцины; отдельные штаммы продуцируют коагулазу, ДНК-азу, H 2 S и энтеротоксины (до 10 видов, характеризующихся летальным, гемолитическим или некротическим действием). Ферментируют некоторые углеводы с выделением кислоты без газа. Устойчивы к лизоциму, чувствительны к различным антибиотикам. Патогенные для человека виды обладают одним из 4 факторов токсичности, таким как: 1) экзотоксин, 2) энтеротоксин, 3) лейкоцидин, 4) коагулаза (фермент патогенности). Кросс-резистентность к антибиотикам контролируется R-плазмидой. Другим прокариотамэтот фактор устойчивостипередается трансдукцией.

Источники и факторы передачи инфекции

Стафилококки - условно патогенные микробы. Являются представителями нормальной микрофлоры человека и животных - густо колонизируют различные биотопы организма (кожу, слизистую носа и зева ротовой полости, брюшную полость и подмышечные области). Стафилококки внедряются в организм через кожные покровы и слизистые оболочки воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем. Механизм инфицирования обычно связан с переносом возбудителя из участков колонизации на травматизированную поверхность (например, кожные покровы). Существенную роль играют также тесные контакты с носителями и лицами, страдающими стафилококковыми поражениями. Стафилококк устойчив ко многим внешним воздействиям, поэтому обнаруживается во внешней среде - воздухе (пыль), почве, на предметах обихода. Источники и факторы передачи стафилококковой инфекции множественные. Основные источники - больные со стертыми формами стафилококковой инфекции или носители, реже - заболевшие животные, например, (при пищевых стафилококковых отравлениях и энтероколитах) больные маститом коровы. Наибольшую эпидемиологическую опасность представляет медицинский персонал, который может являться носителем госпитальных штаммов стафилококка. Для стафилококковой инфекции характерна множественность механизмов, путей и факторов передачи. Бактерии могут передаваться контактно через нестерильный медицинский инструмент, руки медперсонала, алиментарно с молочными продуктами и кондитерскими изделиями, аэрогенно и парентерально (при инъекциях).

Патогенез

Восприимчивость к стафилококкам очень низкая у лиц с нормальным иммунным статусом и повышенная у иммунокомпромиссных хозяев. Очень часто стафилококковая инфекция развивается на фоне вторичных иммунодефицитов. Факторами патогенности возбудителя является микрокапсула, компоненты клеточной стенки, ферменты агрессии и токсины. Микрокапсула защищает бактерии от фагоцитоза, способствует адгезии микробов и их распространению по тканям. При выращивании in vitro она не образуется. Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций и нейтрализуют иммуноглобулины, обездвиживают фагоциты. Тейховые кислоты запускают каскад комплимента (компонента иммунологических реакций) по альтернативному пути. Фермент агрессии стафилококков коагулаза существует в трех антигенных формах и вызывает свертывание сыворотки крови. При целом ряде патологических состояний организма стафилококки покидают свои обычные биотопы, преодолевают тканевые барьеры и привносятся кровотоком во внутреннюю стерильную среду организма. Там они вызывают типовую патологическую реакцию - воспаление. Оно проявляется в форме гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести, вплоть до сепсиса и септикопиемии. Стафилококки являются этиологическим фактором заболеваний, подавляющее большинство которых носят гнойно-воспалительный характер. Бактерии способны поражать практически любые ткани организма. Вызываемые S. aureus инфекции разнообразны и включают более 100 нозологических форм, в числе которых болезни: 1) кожи и подкожной клетчатки (абцессы, панариции, фурункулез и др.), 2) органов дыхания (ангина, плеврит, пневмония и др.), 3) нервной системы и органов чувств (менингит, отит, коньюктивит и др.), 4) органов пищеварения (стоматит, перетонит, энтерит, энтероколит, пищевая интоксикация и др.), 5) костно-мышечной системы и соединительной ткани (артриты, остеомиелит), 6) кровообращения (эндокардит, флебит и др.), 7) мочеполовых органов (цистит, мастит и др.), 8) стафилококковый сепсис . Эти заболевания могут протекать остро или хронически. Пищевые отравления клинически проявляются в форме рвоты и водянистой диареи уже через 2-6 ч после употребления в пищу инфицированных продуктов - кондитерских изделий с кремом, консервов, мясных и овощных салатов и т.д.

Методы обнаружения

На селективных дифференциальных средах вырастают, как правило, только колонии стафилококков. Предположить стафилококковую этиологию заболевания позволяет выделение стафилококка в чистой культуре. Биоматериал для исследования выбирается в зависимости от клинической картины болезни. У штаммов S. aureus, выделенных при пищевой стафилококковой интоксикации, определяют наличие энтеротоксинов в биологических и иммунологических тестах. Традиционными методами предварительные результаты по идентификации стафилококковой инфекции можно получить через 1-2 суток.

Классический метод

Метод обнаружения S. aureus основан на высеве навески продукта и/или разведений его навески в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных типичных и/или атипичных колоний к S. aureus.

Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.

Культуральные свойства: Стафилококки -- факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитическими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными(образование некоторых токсинов происходит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно - патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки - стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза - защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза - разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез. Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи -- респираторный, контактно-бытовой, алиментарный.

Иммунитет: Постинфекционный - клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2--3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus - «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте(компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе).

В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином.

Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.